Talvez. Qual é o tamanho da banda amplificada no controle negativo? Tem o tamanho da banda amplificada no template, ou outro tamanho? Você mediu a concentração do primer antes de montar a reação? Se a concentração de primers na reação estiver muito alta, eles podem formar dímeros. Reduza a concentração dos primers na reação e repita a PCR. Caso a banda persista, se ela for do mesmo tamanho que a banda amplificada no template, é possível que tenha havido contaminação. Para evitar contaminações, siga nossas recomendações:
- Esteja de luvas limpas e use apenas ponteiras, tubos e reagentes autoclavados ao manipular oligos;
- Dissolva oligos e sondas em TE 1X [10 mM Tris-HCl, EDTA 0,1 mM (pH 7,5 - 8,0)], e as diluições das soluções de trabalho em água nuclease-free;
- Faça alíquotas pequenas, de acordo com a sua demanda, de forma que sempre que precisar possa utilizar uma nova alíquota, evitando assim o frequente descongelamento/recongelamento e, principalmente, a contaminação do estoque.
