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3 dicas para Oligos com vida longa!

Atualizado: 19 de Dez de 2018


Secos ou em solução, oligonucleotídeos são extremamente estáveis desde que não estejam contaminados por substâncias que provoquem sua degradação. Se bem conservados, eles devem manter-se funcionais por muito tempo!

Preparamos 3 dicas para a manutenção e o manuseio correto dos seus oligos:

1 - Use sempre luvas limpas e materiais estéreis e autoclavados ao manipular os tubos e pipetar os oligos

Dessa forma você evitará a contaminação dos seus oligos com DNAs exógenos e outras impurezas, como as DNAses, que podem degradar os oligos.

2 – Siga este protocolo para a ressuspensão dos oligos

Os oligos sintetizados pela Exxtend são enviados secos, pois são altamente estáveis nessa forma. Após receber o oligo, centrifugue o tubo para ter certeza de que qualquer porção do oligo seco que tenha se desprendido durante o processo de envio retorne ao fundo do tubo. Para dissolver o oligo utilize solução de tampão TE 1X [10 mM Tris-HCl, EDTA 0,1 mM (pH 8,0)].

-TRIS 1 M (pH = 8,0) Tris base: 121,12 g Ajustar pH 8,0 com HCl q.s.p. 1000 mL de água Milli-Q

- EDTA 0,5 M (pH = 8,0) EDTA: 9,305 g (PM = 372,22) Ajustar pH = 8,0 com NaOH concentrado q.s.p. 50 mL de água Milli-Q

Autoclave as soluções de EDTA e Tris antes de preparar a solução tampão TE 1X.

- Solução Tampão TE 1X [10 mM Tris-HCl, EDTA 0,1 mM (pH 8,0)] 5 mL de Tris 1 M 0,1 mL (100 µL) de EDTA 0,5 M 494,9 mL de água Milli-Q

Armazene o TE 1X em temperatura ambiente em frasco bem vedado.

A folha de dados traz a indicação do volume de TE 1X a ser usado para ter o oligo na concentração estoque (100 pmol/µL = 100 µM). Deixe o oligo hidratar por alguns minutos com vórtex intermitente. Sua solução estoque está pronta! Nota: Recomendamos que seja feita a quantificação.

A diluição para a concentração de trabalho deve ser feita em água Milli-Q. Isso porque apesar do TE ser um tampão que mantém o pH da solução constante e protege o oligo contra degradação, o EDTA é um agente quelante e em alta concentração pode inibir a PCR. Repare que nosso TE utiliza EDTA 0,1 mM, e não 1 mM como em muitos protocolos de laboratório. Utilizando EDTA na concentração indicada, e diluindo a solução de trabalho em água Milli-Q, você terá seus oligos protegidos e perfeitamente funcionais.


3 – Faça alíquotas e armazene a -20° C

Faça diversas alíquotas do estoque! Faça suas alíquotas de acordo com a sua demanda, de forma que sempre que precisar possa utilizar uma nova alíquota, evitando assim o frequente congelamento e descongelamento e, principalmente, a possível contaminação do estoque. Armazene tudo a -20° C.

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