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Suporte Científico

Nosso time de Suporte Científico esclarece suas dúvidas técnicas sobre a utilização dos nossos Oligos e Sondas de DNA.

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Horário de atendimento: de segunda a sexta-feira, das 08h00 às 17h30, exceto em feriados nacionais.

Sequenciamento

A Exxtend, em parceria com a Proteobras, traz aos seus clientes mais uma solução em biologia molecular: o Sequenciamento de DNA.

 

Ao permitir a identificação exata da sequência das bases nitrogenadas em uma molécula de DNA, o sequenciamento constitui uma importante ferramenta para os pesquisadores. Trata-se da técnica ideal para a confirmação da inserção de fragmentos ou genes em vetores, identificação de mutações, inserções e deleções em genes, genotipagem de SNPs e identificação de espécies, dentre muitas outras aplicações.

Para pedidos e orçamentos, enviar e-mail para  exxtend@exxtend.com.br solicitando contato de um Consultor Técnico ou pelo formulário abaixo.

Investimento

Uma amostra constitui-se do template + 1 primer. Caso queira sequenciar ambas as fitas de DNA do seu template, são necessárias duas reações de sequenciamento: amostra + primer forward e amostra + primer reverse. 

Checklist para envio de amostras para sequenciamento

Verifique o tipo de amostra enviada e certifique-se que todos os itens estão acertados.

 

1. Sequenciamento de produto de PCR purificado pelo pesquisador.

  • Enviar primer Forward, primer Reverse e amostra em tubos separados. Todos os tubos devidamente rotulados;

    • Primers: 3 µL, na concentração de 10 pmol/µL (=10 mM). Atenção: Primers Forward e Reverse, cada um em seu tubo, nunca misturados.

    • Amostra: 20 µL de produto de PCR purificado. A concentração deve estar entre 10 e 50 ng/µL. Nessa quantidade, a amostra é suficiente para o sequenciamento das fitas forward e reverse (ambos os primers). Caso deseje sequenciar apenas uma fita, enviar apenas 10 µL.

  • Formulário de envio preenchido, com as combinações dos primers e amostras claramente identificadas, e tamanho dos fragmentos (leitura de fragmentos de até 700 pb com um único primer).

  • Recomendado: Foto do gel de agarose com todas as amostras, com volume de amostra injetado e indicação do marcador usado (de preferência, marcador de 100 pb). Veja exemplo do gel abaixo.

2. Sequenciamento de produto de PCR purificado pela Exxtend OU Sequenciamento de produto de PCR sem

    purificação, apenas por diluição.

    Importante: Não podemos garantir a eficiência do sequenciamento sem purificação, pois essa técnica depende da eficiência da PCR realizada.

  • Enviar primer Forward, primer Reverse e amostra em tubos separados. Todos os tubos devidamente rotulados;

    • Primers:  3 µL por amostra, na concentração de 50 pmol/µL (=50 mM). Atenção: Primers Forward e Reverse, cada um em seu tubo, nunca misturados.

    • Amostras: 20 µL de produto de PCR para cada sequenciamento (quantidade de produto mínima para uma reação, isto é, somente um primer). Se for realizar mais de um sequenciamento com a mesma amostra, fitas forward e reverse, enviar o volume correspondente.

  • Formulário de envio preenchido com as combinações dos primers e amostras claramente identificadas e tamanho dos fragmentos.

  • Foto do gel de agarose com todas as amostras, descrição do volume injetado e marcador usado. Veja exemplo do gel abaixo.

3. Sequenciamento de plasmídeos:

  • Enviar primer Forward, primer Reverse e amostra em tubos separados. Todos os tubos devidamente rotulados;

    • Primers:  3µL, na concentração de 10pmol/µL (=10mM). Atenção: Primers Forward e Reverse, cada um em seu tubo, nunca misturados;

    • Amostras: 20µL de solução. A concentração deve estar entre 60 e 100 ng/µL para plasmideos de até 4.000 pb. Para tamanhos maiores, por favor, consulte. Quantidade de produto mínima para duas reações, isto é o sequenciamento das fitas Forward e Reverse (ambos os primers).

 

  • Formulário de envio preenchido, com as combinações dos primers e amostras claramente identificadas e tamanho do produto de PCR ou do vetor + inserto (leitura de fragmentos de até 700 pb com um único primer).

 

Observações:

- Enviar uma quantidade/volume de amostra e primer maior do que será utilizado nas reações de sequenciamento (mínimo de três reações a mais).

 

- Caso a reação de sequenciamento necessite de uma condição especial como DMSO, temperaturas específicas para funcionamento adequado, favor nos informar.

- Para sequenciamentos de produto de PCR sem purificação (apenas por diluição): Não utilize na PCR nenhum mix que contenha loading dyes; utilize apenas reagentes sem corantes (colorless). 

- Após o envio dos resultados de sequenciamento, possíveis sobras de amostras e primers ficarão armazenadas por 10 dias úteis para o caso de o cliente solicitar novos sequenciamentos com as mesmas amostras em novas condições. Após esse prazo, as amostras serão descartadas.

 

Exemplo de Gel:

Envio de amostras

Recomendamos que amostras e primers sejam enviados:

  • Secos, em temperatura ambiente, OU;

  • Em solução, refrigerados

O endereço para envio é:

A/C Caio Perez Gomes
Rua Pedro de Toledo nº 544, Unidade 612
Vila Clementino, São Paulo - SP
CEP 04039-020

Formulário de envio