Na Exxtend, o Controle de Qualidade não é apenas uma checagem final, mas um processo rigoroso que acompanha seu oligo em cada etapa da produção. Desde o primeiro acoplamento de base até a entrega final, nosso compromisso é com a transparência e a precisão para que a sua pesquisa tenha resultados confiáveis.
Entenda as fases que compõem o nosso padrão de excelência em Controle de Qualidade.
Fase 1: Controle da Síntese
O controle de qualidade começa na primeira etapa da produção do oligo, a síntese, com o acompanhamento da detritilação. Esta fase é essencial para garantir que cada base foi acoplada corretamente na sequência.
O que é a Detritilação?
A detritilação é o processo químico de remoção do grupo protetor DMT (dimetoxitritil) que antecede a inserção de uma nova base no oligonucleotídeo. Utilizamos o ácido TCA (tricloracético), cuja reação química é uma troca catiônica que emite uma coloração laranja. Essa cor nos permite confirmar se o acoplamento da base foi eficiente.
- Sinal de qualidade: Quanto mais forte o laranja, melhor foi o acoplamento da base na cadeia.
- Ação imediata (foco na inicial): O monitoramento da primeira detritilação é o mais crítico. Se não houver a presença da coloração logo no início, isso significa que a reação não ocorreu corretamente, e a síntese é interrompida imediatamente para evitar falhas em toda a cadeia.
Se a cor alaranjada aparecer, a síntese continua, mas seguimos monitorando esse sinal visual após cada acoplamento até que o oligo termine de ser sintetizado.
Durante toda a síntese, além do acompanhamento visual da detritilação, um gráfico de eficiência é gerado pela máquina e monitora o acoplamento de cada base. Se a eficiência estiver muito abaixo do aceitável, a síntese é interrompida e reiniciada, garantindo a integridade da sequência.
Fase 2: Quantificação e pureza
Após a purificação, passamos para o controle final, que utiliza a leitura de Densidade Óptica (D.O.) por Nanodrop para medir tanto a quantidade quanto a pureza do material entregue. Na Exxtend, a transparência é um dos pilares, por isso, enviamos a você as duas medidas fundamentais: D.O. e nmol.
D.O. (Densidade Óptica): medindo a concentração
A D.O. mede a quantidade de luz absorvida pela amostra em diferentes comprimentos de onda. O DNA, como os oligonucleotídeos, absorve luz a 260 nm. Ao sabermos quanto de luz foi absorvida nesse comprimento de onda, conseguimos quantificar a quantidade total de oligos na solução.
Realizamos uma varredura completa, pois a luz absorvida também revela a presença de contaminantes:
- 280 nm indica a absorção por proteínas.
- 230 nm indica a absorção por sais e outros compostos orgânicos.
Para garantir que o material seja predominantemente composto por oligos, e não por sais ou outros contaminantes indesejados, analisamos a razão 260/230. O valor ideal é 1,8, sendo 1,5 o mínimo aceitável. Se a curva da amostra não estiver em formato de sino e a razão 260/230 não estiver de acordo, o oligo não está puro o suficiente. Nesse caso, ele será repurificado e testado novamente.
Medida em nmol
Além da D.O., na folha de dados que enviamos, está o valor em nmol (nanomoles). Essa é a medida da quantidade exata de moléculas de oligonucleotídeos em uma amostra, considerando sua massa. É a forma como garantimos que você receba a quantidade correta para seus experimentos, pois trabalhamos com um rendimento mínimo garantido em nmol.
A D.O. mede a concentração geral do material na solução, enquanto o nmol indica a quantidade exata de massa presente. Essas duas medidas juntas garantem precisão e eficiência.
O que acontece quando os números não estão no mínimo garantido?
O nosso controle rigoroso da D.O. e nmol nos permite agir imediatamente:
- Rendimento abaixo do mínimo: Se a leitura de D.O. indicar que a concentração do oligo está abaixo do mínimo necessário para atingir o nmol prometido, nós ressintetizamos o oligo do zero. Recomeçar todo o processo garante que você receba a quantidade exata que precisa para os seus experimentos.
- Excesso de sais: Se identificarmos excesso de sais na solução, realizamos uma nova purificação por dessalinização para retirar os contaminantes e testar novamente.
Manter um controle rigoroso da D.O. e nmol é essencial para assegurar que você receba oligos com a qualidade e a concentração ideais para suas análises.
Para nós, transparência é fundamental. Cada oligo enviado acompanha uma Folha de Dados detalhada que atesta todas as análises de Controle de Qualidade realizadas e as medidas para você seguir com os seus experimentos.
